膜粘連蛋白5抗體

交叉反應(yīng) Human,Mouse,Rat,Dog,Pig,Cow,GuineaPig,

產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:500-2000,ELISA=1:5000-10000

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膜粘連蛋白5抗體

膜粘連蛋白-5是一種分子量為35～36KD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力特異性結(jié)合。

將膜粘連蛋白5進(jìn)行熒光素（FITC、PE）或biotin標(biāo)記，以標(biāo)記了的Annexin-V作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。

其意義：檢測早期凋亡的細(xì)胞，同時可區(qū)分活細(xì)胞和壞死細(xì)胞

磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine，PS）正常位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在細(xì)胞凋亡的早期，PS可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。

　　    碘化丙啶（propidine iodide，PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞，PI能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核紅染。因此將Annexin-V與PI匹配使用，就可以將凋亡早晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開來。

　　                        將Annexin-V進(jìn)行熒光素標(biāo)記，檢測早期凋亡的細(xì)胞

方法：

　　  1 懸浮細(xì)胞的染色：將正常培養(yǎng)和誘導(dǎo)凋亡的懸浮細(xì)胞（0.5～1×10

⁶）用PBS洗2次，加入100ul Binding Buffer和FITC標(biāo)記的Annexin-V（20ug/ml）10ul，室溫避光30min，再加入PI（50ug/ml）5ul，避光反應(yīng)5min后，加入400ul Binding Buffer，立即用FACScan進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)定量檢測（一般不超過1h）， 同時以不加AnnexinV-FITC及PI的一管作為陰性對照。

　　  2 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞染色：先用0.25%的胰酶消化，洗滌、染色和分析同懸浮細(xì)胞。

　    3 爬片細(xì)胞染色：同上，最后用熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡進(jìn)行觀察。

　　     注意事項：

　　1 整個操作動作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞。

　　2 操作時注意避光，反應(yīng)完畢后盡快在一小時內(nèi)檢測。